血清的儲存解凍等 蒂科生物 血清

血清

細(xì)胞培養(yǎng)液中添加的血清有牛血清，馬血清，人血清等，其中牛血清是zui常用的血清，分為胎牛血清和新勝小牛血清。胎牛血清是從母牛破腹取出的胎牛中分離出的血清，價格昂貴。新生小牛血清是從剛出生的尚未哺乳的小牛中分離出來的血清，如廠家能做到這一點，新生小牛血清的質(zhì)量與胎牛血清的質(zhì)量相差不大。如小牛出生后已哺乳，從這種小牛中取出的血清中可能含有較多的生物活性物質(zhì)，其質(zhì)量明顯不如前兩張。

血清的質(zhì)量，種類及使用的濃度都有可能影響的細(xì)胞生長，而不同批次的血清支持細(xì)胞生長的能力也不同，尤其是對克隆細(xì)胞的生長，某些批次血清可能含有毒性或抑制細(xì)胞生長的物質(zhì)。因此，在購買大量血清之前，必須對血清支持細(xì)胞生長能力進(jìn)行檢測，然后在大量購買質(zhì)量好的同一批號的血清，并注意以下幾點：

（1）需要長期保存的血清必須儲存于-20℃ -70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月。由于血清結(jié)冰時體積會增加10%，因此，血清在凍入低溫冰箱前，必須預(yù)留一定體積空間，否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。

（2）一般廠商提供的血清為無菌，無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)基一起過濾，切勿直接過濾血清。

（3）瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法：-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解一天。然后移入室溫，待全部溶解后在分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻（小心勿造成氣泡），使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍，這樣溫度改變太大，容易造成蛋白凝集而出現(xiàn)沉淀。

（4）熱滅活是指56℃，30分鐘加熱已*解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻。此熱處理的目的是使用血清中的補體成分（comp l ement）滅活。除非必須，一般不建議作此熱處理，因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多，而且還會影響血清的質(zhì)量.補體參與反應(yīng)有：細(xì)胞毒作用，平滑肌細(xì)胞收縮，肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺，增強吞噬作用，促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨吞噬細(xì)胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化。

（5）切勿將血清在37℃放置太久，否則血清會變得渾濁，同時血清中的有效成分會破會而影響血清質(zhì)量。

（6）血清中的沉淀物絮狀物：主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清纖維蛋白造成，這些絮狀物不會影響血清本身的質(zhì)量。可用離心3000rpm，5分鐘去除，也可不用處理。

顯微鏡下“小黑點”：經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察像“小黑點”，常誤認(rèn)為血清受污染。一般情況下，此小黑點不會影響細(xì)胞生長，但如果懷疑血清質(zhì)量，則應(yīng)立即停止使用，更換另一批號血清。