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當(dāng)前位置:首頁 > 技術(shù)文章 > BOVOGEN品牌,胎牛血清SFBS,新生牛SNCS

BOVOGEN品牌,胎牛血清SFBS,新生牛SNCS

2018-07-12 瀏覽次數(shù):2060

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1、如何儲存和解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損   

將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。

長時間儲存在2~8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、纖粘蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲存血清,并避免反復(fù)凍融。 建議血清應(yīng)保存在-20℃。若存放于4℃時,請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。

2、血清中包含絮狀沉淀,他們是什么,怎么處理?

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀,離心血清(400g,1~2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以,使用產(chǎn)品時要搖動并加熱血清至37℃,沉淀會自然消失.

3、如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?

(1)解凍血清時,隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。   

(2)血清分裝凍存時,須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。   

(3)勿由-20℃直接放置于37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。   

(4) 勿將血清置于37℃太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞,從而影響血清的品質(zhì)。   

(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。   

(6) 若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。

4、培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,可以長期保存嗎?

一旦在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時,盡量在1個月內(nèi)使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分可能在解凍后就開始降解。  

5、細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點是污染嗎?如何處理?   

在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成,首先,要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長的狀態(tài),黑點是否游動。如果細(xì)胞被污染,微生物則會大量繁殖,培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。

(1)細(xì)胞生長過老,破碎的細(xì)胞殘骸;

(2)血清質(zhì)量不好,反復(fù)凍融的結(jié)果;

(3)配制培養(yǎng)基的pH值偏高,不宜細(xì)胞生長;

(4)配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格。可應(yīng)用離心、過濾的方法去除這些黑點;

(5)培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點,可能是原代組織中的雜質(zhì),多次傳代可以消除。  

 6、細(xì)胞培養(yǎng)中如何防止黑點生成?

(1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù);

(2) 培養(yǎng)基無需37℃水浴;

(3) 培養(yǎng)基保持*PH值7.0~7.2;

(4) 嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì),容器定期刷洗;

(5) 掌握細(xì)胞傳代的*時機,細(xì)胞切勿生長過老。

7、 為什么要熱滅活血清?

加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué) 研究,培養(yǎng)ES細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞時,推薦使用熱滅活血清。

8、有必要做熱滅活嗎?

實驗顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn),或*沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認(rèn)為是微生物 的分裂擴增。若非必須,可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時間,更確保血清的質(zhì)量!

  1. 小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項?

來源不同:胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。
    組份與比例不同:兩者所含的促細(xì)胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同,用途與用法不同:某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長,而有些細(xì)胞只需小牛血清即可,使用濃度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的濃度在20%。

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