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人回腸直腸腺癌細胞五氟尿嘧啶

2020-09-03 瀏覽次數:1081

hct8/5-fu人回腸直腸腺癌細胞五氟尿嘧啶

1) 來源:蒂科生物細胞庫

2) 形態:貼壁 上皮樣

3) 含量:>1x106 個/mL

4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

6) 運輸:順豐發貨

培養條件:

培養基:90% RPMI-1640 +10% FBS +0.5μg/ml 5-FU(推薦HAKATA貨號:HN-FBS-500)

溫度:37℃     氣相:95%空氣,5%二氧化碳

傳代

1.用75%酒精噴灑整個培養瓶消毒,將其平躺置于培養箱中進行1-3小時的緩沖,.然后置于無菌操作臺,打開瓶口,將其中的培養液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養基(以T25培養瓶為例)并置于細胞培養箱中培養,根據細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液以及傳代,一般2到3天換一次液

2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%,需要對其進行傳代,傳代比例為1:2到1:4

3傳代步驟:將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預熱,倒掉培養瓶中的培養基,往培養瓶中加入3-5 ml PBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2 ml預熱好的胰酶,置于37°孵育消化(diyi次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察,以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為jia消化時間,記錄jia消化時間,以便于下次消化),消化好后加入3ml*培養基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞,使之*脫落,然后收集細胞懸液,1200rpm離心3min,棄上清,加入*培養基重懸細胞,進行傳代。

凍存:

建議使用本公司無血清細胞凍存液貨號:H-W-100,用4度保存的冷凍液直接重懸細胞,不能預熱后使用。

保存條件:液氮存儲

溫馨提示(常見問題,處理方式

T25瓶為例;

1.細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入2ml*培養基終止消化,可使用血球計數板計數。

2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。

3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

 

注:diyi次傳代推薦傳代比例為1:2,以后傳代比例可根據客戶需要自己決定。

細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存

 

熱銷細胞:M001 3T3-L1 小鼠胚胎成纖維細胞 DMEM(H)+10%NCS 貼壁 成纖維細胞樣

M002 NIH/3T3 小鼠胚胎細胞 DMEM(H)+10%NCS 貼壁 成纖維細胞樣

M003 Raw264.7 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞 DMEM(H)+10%FBS 貼壁 部分懸浮 圓形

M004 B16-F10 小鼠黑色素瘤高轉細胞 DMEM(H)+10%FBS 貼壁 上皮樣和紡錘形混合

M005 B16 小鼠黑色素瘤細胞 DMEM(H)+10%FBS 貼壁 上皮樣和紡錘形混合

M006 CT26.WT 小鼠結腸癌細胞 DMEM(H)+10%FBS 貼壁 成纖維細胞樣

M007 SV40 MES 13 小鼠腎小球系膜細胞 DMEM/F12(3:1)+14 mM HEPES+5%FBS 貼壁 肌成纖維細胞樣

M008 F9 小鼠畸胎瘤細胞 DMEM(H)+10%FBS 貼壁 上皮樣

M009 MLE-12 小鼠肺泡上皮細胞 DMEM(H)+10%FBS 貼壁 上皮樣

M010 Sp2/0-Ag14 小鼠骨髓瘤細胞 DMEM(H)+10%FBS 懸浮 淋巴母細胞樣

M011 BV 2 小鼠小膠質細胞   1640+10%FBS 貼壁 上皮樣 多種混合

M012 DC2.4 小鼠樹突狀細胞 1640+10%FBS 貼壁 樹突狀

M013 U14 小鼠子宮頸癌細胞 DMEM(H)+10%FBS 貼壁 上皮樣

M014 M-NFS-60 小鼠骨髓性白血病細胞 1640+10%fbs+62 ng/ml M-CSF+0.05mM2-巰DDD 懸浮 淋巴母細胞樣

M015 mMSC 小鼠骨髓間充質干細胞 DMEM/F12+10% FBS 貼壁 成纖維細胞樣

M016 HL-1 小鼠心肌細胞 DMEM+10%FBS 貼壁 成肌細胞樣

M017 tm3 小鼠睪丸間質細胞 df12+5%hs+5%fbs 貼壁 上皮樣

M018 k7m2.wt 小鼠骨肉瘤成骨細胞 DMEM+10%FBS 貼壁 成骨細胞樣

M019 mc3t3 e1 小鼠胚胎成骨細胞前體細胞 DMEM+10% FBS 貼壁 成纖維細胞樣

M020 hepa1-6 小鼠肝癌細胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮樣

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