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技術文章 / article
細胞培養小常識
2021-11-05 瀏覽次數：1293
切記，細胞培養基的儲存條件是2-8℃。如果細胞培養基不小心被凍，您應該融化培養基并觀察是否有沉淀產生。如果沒有沉淀產生，培養基可以正常使用，如果出現沉淀，只能丟棄這些培養基。
2.貯存在冰箱中的瓶口已開的培養基，可能在放置幾天后顏色變紫。這主要是由于在暴露到周圍的CO2水平時，碳酸氫鈉導致了pH值的上升。您可以在使用前松開瓶口，在CO2培養箱孵育培養基10-15min，來校正溶液的pH值(確定松開瓶口以保證氣體交換)。
3.當在無血清培養基中添加抗生素時，降低至少在有血清培養基中所使用濃度的50%。血清蛋白會結合和滅活一些抗生素。在無血清培養條件下，抗生素不被滅活，可能對于細胞達到毒性水平。
4.一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時，您應該在兩到三周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。
5.總之，大部分添加物和試劑最多可以凍融3次，如果次數更多都會在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，將會影響它的性能。6.血清的熱滅活在免疫分析時可以滅活補體系統。在免疫學研究，培養ES細胞，昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。熱滅活是以往*的操作步驟，并沒有確鑿的證據說明這樣做是有益的。相反，對大部分細胞而言，GIBCO和HyClone都不推薦熱滅活血清。因為加熱可能使血清中的沉淀增加，使您誤以為污染。
7.在進行傳代培養時，我們強烈推薦進行臺盼蘭活性記數。研究者常常通過一個簡單的稀釋(1∶4或1∶2)進行傳代，不進行活性檢測，您可能接種比你認為的低得多的濃度的細胞，這常常可能導致生長緩慢或培養物根本不生長。
8.在訂購的細胞到達后，應立即復蘇，如果培養基還沒有準備好，可將其放入液氮中，盡快復蘇。千萬不能放置在-20或-80℃的冰箱內。
9.細胞復蘇往往是比較容易出問題的步驟。請在訂購細胞時就向供應商索取詳細的復蘇步驟，并仔細閱讀。有些供應商就不推薦在復蘇時離心，對此類細節，應特別留意。
如何避免血清中沉淀物的產生?
1. 解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫)，若血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃)，實驗顯示非常容易產生沉淀物。并隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發生。
2. 請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質量。
3.血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。
4.若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30min的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。
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