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    如何正確的操作細(xì)胞凍存?

    2021-11-29 瀏覽次數(shù):1884

    1.冷凍保存方法:

    (1)傳統(tǒng)方法:冷存管置于4C10分鐘-->-20C30分鐘-->-80C 16~ 18小時(或隔夜)-->液氮槽vaporphase長期儲存。

    -20C不可超過1小時,以防止胞內(nèi)冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80C冰箱中,惟存活率稍微降低些。

    (2)程序降溫:利用已設(shè)定程序的等速降溫機(jī)以-1~-3C/分鐘之速度由室溫降至(-80C以下) -120C,再放在液氮槽vaporphase長期儲存。適用于懸浮型細(xì)胞與hybridoma之保存。

    (3)HAKATA無血清細(xì)胞凍存: 加入HAKATA無血清細(xì)胞凍存液制成懸液,直接凍于-80°C,可保存≥5年。

    2.操作步驟:

    (1)冷凍24-48小時更換半里或全里培養(yǎng)基,使細(xì)胞處于指數(shù)生長期。

    (2)配制冷凍保存溶液(使用配制):另取離心管,加入培養(yǎng)基、血清,逐滴加入二甲基亞礬(DMSO)至20%濃度,即制成雙倍的凍存液,置于室溫下待用。

    (3)離心收集培養(yǎng)之細(xì)胞,用加血清的培養(yǎng)基重懸起細(xì)胞,取少里細(xì)胞懸浮液(約0.1m1)計數(shù)細(xì)胞濃度及凍存活率。

    (4)取與細(xì)胞懸液等里的凍存液,緩慢逐商加入細(xì)胞懸液,并晃動試管,制成細(xì)胞凍存懸液( DMSO醉后濃度為5~ 10%),使細(xì)胞濃度為1~5x 10*cells/ml,混合均勻,分裝于已標(biāo)示*之冷凍保存管中,1~ 2nl/mal,并取.少里細(xì)胞懸浮液作污染檢測。嚴(yán)密封口后,注明細(xì)胞名稱、代數(shù)、日期。然后進(jìn)行凍存。


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