支原體污染對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)的危害！

1.支原體污染的普遍性

支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域遇到的性問(wèn)題，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，綜合美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）、美國(guó)模式菌種收集中心(ATCC)等機(jī)構(gòu)收到的相關(guān)數(shù)據(jù)，世界各國(guó)細(xì)胞系支原體污染的平均比例為30-60%。該數(shù)據(jù)未統(tǒng)計(jì)中國(guó)大陸的數(shù)據(jù)，但可以確定，大陸地區(qū)的支原體污染比例與此相當(dāng)，或更嚴(yán)重。

2.支原體污染的危害

根據(jù)已發(fā)表的支原體污染研究文獻(xiàn)，支原體污染細(xì)胞后，幾乎能影響每一個(gè)細(xì)胞參數(shù)。

1）支原體污染可能導(dǎo)致細(xì)胞染色體的異常和損傷，改變細(xì)胞的代謝、生長(zhǎng)、形狀、附著。

2）支原體影響被污染細(xì)胞的基因表達(dá)。相關(guān)研究表明，支原體污染的細(xì)胞系與對(duì)照組比較，有多達(dá)200個(gè)基因表達(dá)差異達(dá)2倍以上。

3）導(dǎo)致MTT等細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果嚴(yán)重錯(cuò)誤。支原體對(duì)MTT有額外還原作用。

4）支原體污染能耗盡營(yíng)養(yǎng)物，促進(jìn)代謝積累，重度支原體污染導(dǎo)致pH改變。

5）誘導(dǎo)或抑制細(xì)胞因子表達(dá)，并改變培養(yǎng)細(xì)胞的代謝、增殖特征及形態(tài)。支原體污染可以直接影響L-arginine的代謝

6）支原體污染可以誘導(dǎo)樹(shù)突狀細(xì)胞成熟，這對(duì)于開(kāi)展人體免疫細(xì)胞的腫瘤治療的影響將是災(zāi)難性的。

3.支原體污染的隱蔽性

支原體大小約0.1-0.6微米，體積比病毒稍大，輕度到中度的支原體污染不會(huì)明顯改變細(xì)胞培養(yǎng)液的渾濁度和pH值，也不會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)或生長(zhǎng)速度的明顯改變，所以科研人員很難及時(shí)發(fā)現(xiàn)體外培養(yǎng)的細(xì)胞已經(jīng)被支原體污染，進(jìn)而改變了基因表達(dá)譜，顯示虛假的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果。通常情況下，如果不排除支原體污染因素，很多實(shí)驗(yàn)結(jié)果往往缺乏說(shuō)服力。2013年，Ding級(jí)期刊《Nature》明確要求，在涉及細(xì)胞培養(yǎng)的科研工作中，必須進(jìn)行支原體檢測(cè)，并排除其影響。