細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑膠蟲污染怎么辦？

    “黑膠蟲"可寄生于動(dòng)物細(xì)胞，也可以生存于培養(yǎng)基中，依靠細(xì)胞和培養(yǎng)基中的營養(yǎng)為生，并隨細(xì)胞傳代而傳代。可見“黑膠蟲"是一種異養(yǎng)生物。我們在細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑膠蟲后污染怎么辦？下面有幾個(gè)處理建議，我們一起來了解下吧！

1．換好一點(diǎn)的血清，這樣可以有效減少“小黑點(diǎn)"的形成。一般的血清都不要去滅活處理，為什么呢？

    因?yàn)榻?jīng)過正確處理的熱滅活血清，對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)，或*沒有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱滅活的血清，沉淀物的形成會(huì)顯著增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點(diǎn)"，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。除非是在做免疫學(xué)研究或培養(yǎng)干細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí)，才推薦做熱滅活。所以在不是做免疫學(xué)研究或培養(yǎng)干細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，血清盡量不經(jīng)熱滅活。

2．如果是貼壁細(xì)胞的話，可用無菌的PBS洗幾次，可一定程度上緩解。若是懸浮的話，就不太好處理拉，可以向其中少加一點(diǎn)滋養(yǎng)細(xì)胞。加滋養(yǎng)細(xì)胞對有黑膠蟲的剛復(fù)蘇的細(xì)胞很有效！還有就是實(shí)驗(yàn)環(huán)境要注意好，保持細(xì)胞間整個(gè)環(huán)境的潔凈度。如果細(xì)胞不是非常珍貴，可以用伯氨奎、磺胺、四環(huán)素、貝尼爾，也有建議慶大霉素500ug/ml洗滌。

3．換用好的一次性塑料培養(yǎng)瓶。

4．停止復(fù)蘇，停止養(yǎng)細(xì)胞，*消毒所有用于細(xì)胞培養(yǎng)的一切用品，包括所用的培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)基，吸管，胰酶，孵箱，超凈臺(tái)、空間等等你能想到的和細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的所有物品。一個(gè)星期后，再復(fù)蘇污染之前凍存的細(xì)胞，注意你的白大衣衣袖污染即可。這樣你可能覺得動(dòng)作太大，但可以用一個(gè)星期的時(shí)間挽救兩個(gè)月的時(shí)間，還有其他你為了找到污染源，去除污染所耗費(fèi)的精力，和財(cái)力。

5．在換液前先加入生理鹽水并輕輕拍打，沖洗干凈后再加入培養(yǎng)液，堅(jiān)持天天洗，傳代時(shí)加生理鹽水再離心一次，接種密度稍大一些，一段時(shí)間后，蟲子就會(huì)大大減少，對細(xì)胞的生長也不會(huì)有大的影響。

    所有東西最好重配；如果實(shí)在要搶救，重點(diǎn)突破，留幾瓶污染不是很嚴(yán)重的細(xì)胞搶救，其余棄去

6．如果有其它可用的細(xì)胞，那么污染的細(xì)胞最好扔掉；如沒有，可試著用抗生素，可靠的是細(xì)菌培養(yǎng)加藥敏，據(jù)藥敏結(jié)果選擇抗生素，當(dāng)然不能影響到細(xì)胞的狀態(tài)。

7．有材料稱minocycline具有一定的作用，可以和換液結(jié)合起來使用。

    由于黑膠蟲尚未明確鑒定出是什么生物，所以上述的處理方法不一定正確，可以供考慮采用。

8.有人為尋找到殺滅“黑膠蟲"的方法，做了一個(gè)試驗(yàn)，他取有“黑膠蟲"污染的六孔板，每孔內(nèi)有2ml培養(yǎng)液，向有污染的孔內(nèi)分別加入0.5ml、1ml、2ml、3ml的新潔爾滅原液，邊加邊在倒置顯微鏡下觀察。最后他得出結(jié)論：新潔爾滅與水或培養(yǎng)基的比例為1：4時(shí)即可殺死“黑膠蟲"。但是新潔爾滅對細(xì)胞的負(fù)面影響太大，比較珍貴的細(xì)胞培養(yǎng)最好不采用此方法。

    在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，人們遇到的黒膠蟲并不都是一樣的，有像細(xì)菌的、有像支原體的、有像原蟲的、有像真菌的，還有像細(xì)胞碎片的。在國內(nèi)個(gè)實(shí)驗(yàn)室的器材條件參差不齊，而且實(shí)驗(yàn)人員的操作質(zhì)量也不盡相同，同一種現(xiàn)象也可能有些許差異，當(dāng)用描述出來的現(xiàn)象的差異可能變大也可能變小。所以很多人看到細(xì)胞被細(xì)菌污染了，不好處理，而卻描述出來的現(xiàn)象和流傳的黑膠蟲類似，就會(huì)把培養(yǎng)失敗的原因歸結(jié)到無法處理的黒膠蟲污染，甚至可能說它發(fā)現(xiàn)的是真正的黑膠蟲。這樣的事情多了，黑膠蟲就會(huì)人為的變種，像什么的都有。黑膠蟲是否存在，還有待于科學(xué)的發(fā)展。但有一點(diǎn)可以肯定的，大部分人發(fā)現(xiàn)的“黒膠蟲"并不是真正那個(gè)未知的黒膠蟲，而是不很常見的細(xì)菌、真菌、原蟲等微生物污染。