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技術文章 / article
胰酶使用的注意事項
2022-10-10 瀏覽次數(shù)：1347
胰酶使用注意：
1、在使用胰酶細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。
2、胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長，否則細胞鋪板后生長狀況會較差。
貼壁細胞的消化：
1、吸去培養(yǎng)液，用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清
2、加入少量胰酶細胞消化液，略蓋過細胞即可，根據(jù)胰酶效率差異可以增加惑減少胰酶用量。室溫放置30秒至2分鐘（不同的細胞消化時間有所不同）
3、顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化呈白茫狀；或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來。
4、此時吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的*細胞培養(yǎng)液，吹打下細胞，即可直接用于后續(xù)實驗如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入胰酶細胞消化液重新消化。
如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用胰酶細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000-2000g離心1分鐘，沉淀細胞，盡量去除胰酶細胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細胞，即可用于后續(xù)實驗。
常用的細胞消化液為胰蛋白酶（Trypsin），EDTA等，其功能主要是使細胞間的蛋白質（如細胞外基質）水解，改變細胞間的連接，使組織或細胞片分散成單個細胞，制成細胞懸液用于進一步的實驗。
影響消化速度的因素較多，主要有胰酶溶液的活性（配制條件、凍存或4℃保存時間長短、是否反復凍融、化凍后存放時間及溫度等）、消化時的溫度（氣溫、細胞培養(yǎng)瓶及胰酶溶液的溫度）以及所加胰酶溶液的多少等 。
加入胰蛋白酶-EDTA溶液，視細胞瓶的大小加入體積為2ml或更多（依培養(yǎng)器皿的大小而定），以使充分浸潤；
一般消化時間約為1至3分鐘，肉眼觀察瓶底由半透明（細胞單層連接成片）轉為透明、點狀（出現(xiàn)細小空隙）時，棄去細胞消化液，或看見培養(yǎng)瓶壁呈白茫狀即可。并加入適量的*培養(yǎng)液終止消化，吹打分散；如見大量細胞片狀脫落，已消化過頭，則不能頃倒消化液而直接進行下一步操作。（消化過頭，可造成大量細胞從瓶壁上脫下，甚至造成細胞破碎。由于血清含有非特異性胰蛋白酶抑制劑，所以加入*培養(yǎng)基可以終止反應。
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