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技術文章 / article
ECL化學化學發(fā)光底物（超敏）的操作步驟
2023-03-22 瀏覽次數：831
ECL化學化學發(fā)光底物（超敏）可為使用辣根過氧化物酶（HRP）偶聯(lián)物的免疫印跡實驗提供明亮的信號和低皮克級檢測靈敏度。 該ECL底物能夠兼容各種膜、封閉液和寬范圍抗體稀釋液，以出色性能、通用性和高性價比，滿足用戶的免疫印跡應用需求。
操作步驟：
1、執(zhí)行常規(guī)SDS-PAGE、轉模和Western Blot步驟。 注意用HRP標記lgG或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP夾法。
2、Western Blot最后一次洗模的同時配置發(fā)光工作液：分別取等體積的A液和B液，放入干凈容器中混合（注意吸取A液和B液的吸頭一定要分開，避免試劑污染）。 建議立即使用工作液，室溫放置數小時后仍可使用但靈敏度有所降低。
3、Western Blot最后一次洗膜后，用鑷子將膜取出，用濾紙吸去多余的洗滌液（切勿接觸膜的蛋白面），然后置于一潔凈保鮮膜上或塑料容器內。
4、根據膜的大小按比例滴加配置好的ECL工作液到膜上，確保工作液均勻覆蓋在膜上，放置1-3分鐘。
5、取膜，用濾紙吸去多余的液體，將膜放在兩篇保鮮膜中間，隨后進行壓片檢測或化學發(fā)光成像儀檢測。
6、壓片檢測：將膜固定于X光膠片暗盒內（注意蛋白面向上）。 暗房內壓X光膠片，分別曝光不同的時間，如數秒到數分鐘，顯影沖洗。
7、化學發(fā)光成像儀檢測：將膜放置到化學發(fā)光成像儀內，參考儀器說明書進行檢測。
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