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技術(shù)文章 / article
在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中血清熱滅活的作用和意義
2023-03-31 瀏覽次數(shù)：1008
一、血清滅活的目的是什么？
1、血清熱滅活目的主要是為了去除血清中補(bǔ)體等對熱敏感的物質(zhì)，但是在胎牛血清中對補(bǔ)體的滅活則明顯沒有必要。
2、實(shí)驗(yàn)員曾對商業(yè)胎牛血清中的補(bǔ)體成分進(jìn)行測定，他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1、C6僅達(dá)成年動(dòng)物血清的1-3%，而其它補(bǔ)體成分僅有成年動(dòng)物的5-50%，至于補(bǔ)體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過補(bǔ)體固定實(shí)驗(yàn)，也未發(fā)現(xiàn)有明顯的溶血現(xiàn)象。多數(shù)實(shí)驗(yàn)室在培養(yǎng)前將培養(yǎng)液進(jìn)行預(yù)熱的過程，也對熱敏的補(bǔ)體有滅活的作用。
3、熱滅活另一個(gè)目的是為了使支原體失活。
二、血清使用前是否都必須熱滅活？
1、在免疫學(xué)研究、培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅活血清。而對于其他大多數(shù)的細(xì)胞來說是不需要熱滅活血清的。
2、很多情況下，熱滅活并不會改善細(xì)胞的生長，反而會降低了支持細(xì)胞生長的能力。即使在少數(shù)有促進(jìn)的情況下，其促進(jìn)的比率也是微不足道。另外，血清的熱滅活導(dǎo)致的沉淀常常被認(rèn)為是微生物污染，從而給用戶帶來不必要的麻煩。
3、我司建議，對血清進(jìn)行滅活的用戶，需要通過試驗(yàn)來證實(shí)其必要性。
三、血清熱滅活應(yīng)該怎么操作？
1、融化血清，并充分混勻其內(nèi)容物。
2、對照瓶裝等量水，插入溫度計(jì)。
3、將血清瓶和對照瓶放入56℃水浴箱。
4、當(dāng)溫度達(dá)到56℃，立即開始計(jì)時(shí)。
5、每5分鐘，旋轉(zhuǎn)血清瓶一次，輕微規(guī)則搖晃，以使瓶中血清受熱均勻一致。656℃，30分鐘后，立刻去除血清。
注意事項(xiàng)：血清滅活時(shí)，避免接觸到加熱管，防止受熱不均勻，導(dǎo)致滅活失敗，血清滅活后，冷水浴冷卻。
四、為什么血清滅活后產(chǎn)生大量沉淀？
1、血清滅活后出現(xiàn)的沉淀大多數(shù)是纖維蛋白析出，屬正常現(xiàn)象。滅活過程多次搖晃使血清受熱均勻可以降低蛋白的析出。
2、當(dāng)血清在未全化凍狀態(tài)時(shí)直接置56℃水浴、滅活過程中局部受熱過高、加熱時(shí)間過長就會產(chǎn)生膠狀沉淀，這樣的血清質(zhì)量嚴(yán)重受損，是無法繼續(xù)正常使用的。
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