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技術(shù)文章 / article
牛血清白蛋白（BSA）的應(yīng)用
2023-08-29 瀏覽次數(shù)：974
牛血清白蛋白（BSA）是牛血清中的一種球蛋白，包含607個氨基酸殘基，分子量為66.446KDa，等電點為4.7。
應(yīng)用：
牛血清白蛋白（BSA）在生化實驗中有廣泛的應(yīng)用，例如在WB實驗中加入BSA，通過提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度，對酶起保護作用。
防止酶的分解和非特異性吸附，能減輕有些酶的變性減輕不利環(huán)境因素，如加熱、表面張力及化學(xué)因素引起的變性。
測定蛋白濃度
按50：1配置BCA工作液。
10ulC液（蛋白標(biāo)準(zhǔn)）+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液。
再分別以0、1、2、4、8、12、16、20ul將蛋白標(biāo)準(zhǔn)液加入96孔板的第1~8標(biāo)準(zhǔn)孔中，在其他樣品孔中加入10ul待測樣品。
分別加PBS定容至20ul。
各孔中加入200ulBCA工作液，室溫放置2小時。
用酶標(biāo)儀測定蛋白濃度：測定A562，依標(biāo)準(zhǔn)曲線算出蛋白濃度。
SDS-PAGE電泳
1、制膠：按比例配制分離膠，緩緩地搖動溶液，使激活劑混合均勻，將凝膠溶液平緩地注入兩層玻璃極中，再在液面上小心注入一層水，以阻止氧氣進入凝膠溶液中，靜置40min。
同前按比例配制濃縮膠，但混勻溶液時不要過于劇烈以免引入過多地氧氣。
吸去不連續(xù)系統(tǒng)中下層分離膠上的水分，連續(xù)平穩(wěn)的注入凝膠溶液，然后小心插入梳子并注意不得在齒尖留有氣泡，靜制60min以上以保證聚合。
2、預(yù)電泳：將聚合好的凝膠安置于電泳槽中，小心拔去梳子，加入電泳緩沖液后低電壓10-20V的預(yù)電泳20-30min。
（目的是清除凝膠內(nèi)的雜質(zhì)， 疏通凝膠孔徑以保證電泳過程中電泳的暢通）。
3、樣品準(zhǔn)備：首先計算上樣體積，然后按樣品上樣buffer=4：1的比例加入上樣bufer混勻，沸水10分鐘，冰上5分鐘。
4、加樣：預(yù)電泳后依次加入標(biāo)準(zhǔn)品（Marker）和待分析樣品。
（加樣時間要盡量短，以免樣品擴散，可在未加樣的孔中加入等量的樣品緩沖液避免邊緣效應(yīng)。每個泳道加5ul 。）
5、電泳：加樣完畢，選擇80V恒壓進行電泳，電泳直至溴酚藍染料前沿到達兩膠交界處（一般約20分鐘），更換至100V恒壓電泳，電泳直至溴酚藍染料前沿下至凝膠末端處，即停止電泳（一般約為1小時20分鐘）。
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