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CRFK細(xì)胞系貓腎細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞就像養(yǎng)孩子，甚至比養(yǎng)孩子還難。培養(yǎng)液的問題比較大。因 此配制培養(yǎng)液后一定要做無菌試驗，過濾時要注意濾膜本身及其安裝是否有問題；其次，要排除培 養(yǎng)液保存問題，比如，瓶蓋有裂隙或者是蓋子與瓶口不合，密閉性差，容易細(xì)菌污染。還有就是操 作過程中出了問題，不注意無菌操作，消毒不嚴(yán)格，造成培養(yǎng)液的污染。超凈工作臺、手的消毒， 拿培養(yǎng)瓶時不要拿蓋子及其周圍，培養(yǎng)液開蓋后要斜著放，瓶蓋橫放，蓋口不要向上或向下，培養(yǎng) 瓶等盡量放在工作臺的中間等等。總之，關(guān)鍵是無菌及無菌操作，做到這兩點應(yīng)該不會出什么差錯 了。

實驗技術(shù)服務(wù)內(nèi)容。歡迎廣大師生選購。

關(guān)鍵詞：細(xì)胞

簡介：全國統(tǒng)一價格，全國各地均可發(fā)貨，遠(yuǎn)到香港、澳門、福建、新疆、內(nèi)蒙古等地:

產(chǎn)品名稱：細(xì)胞

庫存狀態(tài)：現(xiàn)貨

細(xì)胞規(guī)格：株

質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：無支原體、無污染、符合標(biāo)準(zhǔn)

運輸方式：新鮮運輸和凍存管運輸

貨期：新鮮運輸需要1-2周，凍存管運輸?shù)男枰?-3天

我公司致力于生物醫(yī)藥領(lǐng)域的技術(shù)研發(fā)與生物試劑的銷售，力求為中國廣大生物科技研究者提供zui快捷的貼心服務(wù)。公司集研發(fā)、銷售、實驗室技術(shù)服務(wù)于一體，并以多家歐美研究平臺先進(jìn)的技術(shù)實力為依托，向中國市場提供品質(zhì)國內(nèi)價格的*服務(wù)，專業(yè)提供實驗所需的各類細(xì)胞株，因子，抗體等多種生物試劑。公司細(xì)胞主要來源ATCC,ECACC,ScienCell,ACC, Invitrogen 等，以及少數(shù)國內(nèi)外大學(xué)建系。同時提供各種技術(shù)服務(wù) 整體課題 論文（SCI）服務(wù)等。輕小利，重品質(zhì)。避浮夸，求務(wù)實。您的滿意，將是我們不懈的追求。竭誠歡迎廣大生物科技研究老師，前來咨詢合作

復(fù)蘇操作步驟：

實驗前準(zhǔn)備：

1.將水浴鍋預(yù)熱至37℃

2.用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。

3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等

迅速解凍：

1.    迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍，并要不斷的搖動，使管中的液體迅速融化，時間控制在1分鐘左右

離心去除凍存液：

1．  融解好的細(xì)胞迅速放進(jìn)離心機(jī)中，2000r/min 或者600g離心2min

2．  吸棄上清液。

3．  用4-5ml*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，吹打制成單細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度以5×105/ml為宜。

4．  將復(fù)蘇好的細(xì)胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內(nèi)，將培養(yǎng)瓶放入37℃和5％CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)，8-24小時后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)，換液的時間由細(xì)胞生長情況而定

凍存液成分：10%DMSO + 40%血清+50%基礎(chǔ)培養(yǎng)液

污染的種類可分成細(xì)菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉?jié){菌。主要的污染原因為無菌操作技術(shù)不當(dāng)、操作室 環(huán)境不佳、污染之血清和污染之細(xì)胞等。嚴(yán)格之無菌操作技術(shù)、清潔的環(huán)境、與品質(zhì)良好之細(xì)胞來源和培養(yǎng) 基配制是減低污染之方法。2.如果細(xì)胞發(fā)生微生物污染時，應(yīng)如何處理？直接滅菌后丟棄之。3.購買之細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后，為何會發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形？ 研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少， 大都是因為離心過程操作上的失誤，造成細(xì)胞的物理性 損傷， 以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心，應(yīng)待細(xì)胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可。4.購買之細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因？ 研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳， 常見原因可歸納為：培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用 錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細(xì)胞解凍后，加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細(xì)胞置于-80℃太久。5.收到之冷凍管瓶身破裂，瓶蓋有裂紋，或瓶蓋脫落之原因？ 冷凍管瓶蓋裂紋，或瓶身破裂，可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當(dāng)，造成冷凍管裂損，建議使用止血 鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫，乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象，冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染，故冷凍管于放入和取出液氮桶時，均應(yīng)立刻將冷凍管再一次擰緊。

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