血清的常用問題及處理方法‖蒂科生物16010-159

1、如何儲存和解凍血清才不會使產品質量受損？

 將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規則地搖晃均勻。長時間儲存在2－8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲存血清，并避免反復凍融。我們建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。

2、血清中包含絮狀沉淀，它們是什么，怎么處理？

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會影響產品性質。要除去沉淀，離心血清（400g，1-2分鐘）或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉移到另一個無菌瓶里（一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾）。

大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以，使用產品時要搖動并加熱血清至37℃，沉淀會自然消失。

4、如何避免血清中產生沉淀？

按如下操作可避免沉淀的產生：

（1）解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發生。

 （2）血清分裝凍存時，須規則搖晃均勻（小心勿造成氣泡），使溫度與成分均一。

（3）勿直接由-20℃直接至37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而發生沉淀。

（4）勿將血清置于37℃太久，否則血清會變得渾濁，同時血清中許多較不穩定的成份也會因此受到破壞，從而影響血清的品質。

（5）血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。

（6）若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。

5、培養基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎？

一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時，您應該在兩到三周內使用它。因為一些

抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

6、為什么要熱滅活血清?

 加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。

在免疫學研究，培養ES細胞、平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。

7、有必要做熱滅活嗎?

 實驗顯示，經過正確處理的熱滅活血清，對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或*沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認

為是微生物的分裂擴增。若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節省時間，更確

保血清的質量!

 8、細胞培養中出現黑點是污染嗎？如何處理？一旦您在細胞培養的過程中發現有黑點生成，

首先，

要肉眼觀察培養基是否混濁，

然后，

在鏡下觀察培養細胞生長的狀態，黑點是否游動。如果細胞被污染，微生物則會大量繁

殖，培養基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀

察細胞，生長狀態良好，與黑點出現前相比，沒有任何變化，那么，黑點的出現可能與

以下幾種情況有關：

（1）細胞生長過老，破碎的細胞殘骸；

（2）血清質量不好，反復凍融的結果；

（3）配制培養基的pH值偏高，不宜細胞生長；

（4）配制培養基的水質、容器不合格。可應用離心、過濾的方法去除這些黑點；

（5）培養原代細胞中出現小黑點，可能是原代組織中的雜質，多次傳代可以消除。

9、細胞培養中如何防止黑點生成？

 （1）盡可能地減少血清凍融次數。

（2）培養基無需37℃水浴。

（3）培養基保持*PH值7.0- 7.2。

（4）嚴格控制配制培養基的水質，容器定期刷洗。

（5） 掌握細胞傳代的*時機，細胞切勿生長過老。

 使用前處理：大部分血清在使用前必須滅活處理，即56℃30分鐘。滅活的目的是去除血清中的補體成分，避免補體對細胞產生毒性作用。血清經過滅活也會損失一些對細胞有利的成分，如生長因子，因此也有人提出血清不經滅活直接用于培養，這樣做的前提是確認血清中不含補體成分。對于一些品質高的胎牛血清和新牛血清可以考慮不經滅活直接用于細胞培養。

儲存條件：血清一般儲存于－20℃，同時應避免反復凍融。購買大包裝的血清后，首先要滅活處理，然后分裝成小包裝，儲存于－20℃，使用前融化。融化時現置于4℃。融化后的血清在4℃不宜長時間存放，應盡快使用。

使用濃度：自從有了合成培養基，血清就是作為一種添加成分與合成培養基混合使用，使用濃度一般為5－20％，zui常用是10％。過多血清容易使培養中的細胞發生變化，

特別是一些二倍體的無限細胞系，迅速生長之后容易發生惡性轉化。