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    hUC-MSCs ,人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞說明書

    2019-03-20 瀏覽次數(shù):2811

    hUC-MSCs ,人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞說明書

    中文名稱:人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 

    代號(hào):hUCMSCs  

    出售信息:P1-P3代

    來源:取自滿月自然分娩的胎兒臍帶,檢測(cè)結(jié)果表明,本產(chǎn)品無細(xì)菌、真菌、支原體和病毒污染,表達(dá)多種間充質(zhì)干細(xì)胞特異標(biāo)記,具有良好的增殖和分化潛能,可以分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞等。

    生長特性:貼壁生長(形態(tài)紡錘狀,成纖維細(xì)胞樣)

    培養(yǎng)條件: DMEM/F12 90%+FBS 10%+b-FGF 10ng/mL (建議使用本公司間充質(zhì)干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基)

    溫度:37℃  氣相:95%空氣,5%二氧化碳

    培養(yǎng)瓶/皿:使用無血清培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)使用針對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞特別TC處理的培養(yǎng)瓶/皿,或使用纖連蛋白或其他促貼壁試劑包被過的培養(yǎng)瓶/皿

    一、細(xì)胞特性:

    經(jīng)測(cè)試,本產(chǎn)品具有良好的增殖和分化潛能,可分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞等。流式檢測(cè)結(jié)果顯示,CD29、CD44、CD73、CD105、CD166陽性,CD11a、CD34、CD45陰性。

    二、運(yùn)輸保存:采用干冰保存運(yùn)輸

    收到細(xì)胞時(shí),若干冰已經(jīng)*融化,請(qǐng)立即將細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng);若尚留有干冰,請(qǐng)立即將細(xì)胞放入液氮中保存待用,請(qǐng)按條件貯存細(xì)胞,切不可將細(xì)胞置于高溫環(huán)境。

    三、產(chǎn)品承諾:

    人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)周期有限。建議使用本公司配套的培養(yǎng)基和正確的培養(yǎng)方法來解凍、傳代,以此保證細(xì)胞具備良好的增殖和分化能力。

    四、用途:

    本產(chǎn)品只提供給進(jìn)一步的科研使用,不可應(yīng)用于治療、臨床等其他方面。

    1用75%酒精噴灑整個(gè)培養(yǎng)瓶消毒,將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行1-3小時(shí)的緩沖,然后置于無菌操作臺(tái),打開瓶口,將其中的培養(yǎng)液去掉,再往其中加入5-6 mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液以及傳代,一般2到3天換一次液。

    2待細(xì)胞長滿瓶底面積80%-90%,需要對(duì)其進(jìn)行傳代,次傳代比例為1:3,之后推薦傳代比例為1:5到1:10。

    3、傳代步驟:將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液與DPBS置于37°預(yù)熱,倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml DPBS,輕晃洗滌后棄去。使用DPBS將胰酶稀釋4倍,往瓶中加2 ml稀釋后的胰酶,置于室溫孵育消化(次消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀察,以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細(xì)胞脫落為zui佳消化時(shí)間,記錄zui 佳消化時(shí)間,以便于下次消化),消化好后加入2ml含血清的*培養(yǎng)基或其他胰酶中和液終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之*脫落,然后收集細(xì)胞懸液并吹打成單個(gè)細(xì)胞懸液,1200rpm離心5min,棄上清,加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,進(jìn)行傳代。

    五、凍存條件:液氮存儲(chǔ)

    80%*培養(yǎng)基+10%FBS+10%DMSO備注:建議使用本公司的冷凍液(H-W-100),用4度保存的冷凍液直接重懸細(xì)胞,不能預(yù)熱后使用。

    六、常見問題以及解決方案

    1培養(yǎng)瓶有破裂,培養(yǎng)液有漏液:細(xì)胞極大可能會(huì)污染,所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。

    2、收到細(xì)胞后盡快更換為含 10%血清的新鮮培養(yǎng)基,如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基,請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加 10%的血清(原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間zui長不宜超過 72 小時(shí))

    3、細(xì)胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。1-2小時(shí)后觀察,如細(xì)胞大部分又貼回瓶底,表明細(xì)胞活力正常,剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉,留8-10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,細(xì)胞生長至匯合度80%,進(jìn)行消化傳代;如細(xì)胞還是不貼壁,將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶,原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),中間注意觀察,我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo),直到問題解決。

      以上說明書僅供參考,請(qǐng)以隨貨說明書為主

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