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    胎牛血清的這些指標(biāo)你都知道嗎?

    2021-11-11 瀏覽次數(shù):2491

    牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份,常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。
    1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物,以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。
    2. 提供結(jié)合蛋白,能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。
    3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用。
    4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來(lái)源。
    5.起酸堿度緩沖液作用。
    6.提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害。


    胎牛血清都有哪些重要的指標(biāo)


    一、內(nèi)毒素
    內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁外壁層上的*成分。當(dāng)細(xì)菌死亡自溶或粘附在其它細(xì)胞時(shí),才表現(xiàn)其毒性。內(nèi)毒素直接參與細(xì)胞凋亡,血清中內(nèi)毒素含量越低,對(duì)細(xì)胞毒性越小,越利于細(xì)胞的生長(zhǎng)和傳代;內(nèi)毒素含量過(guò)高,會(huì)直接導(dǎo)致細(xì)胞提前老化。國(guó)際上規(guī)定,胎牛血清的級(jí)別,應(yīng)以內(nèi)毒素水平的高低來(lái)確定,其中,特級(jí)胎牛血清的內(nèi)毒素應(yīng)<10EU/ml

    二、血紅蛋白含量
    胎牛血清的顏色會(huì)根據(jù)血紅蛋白含量的不同表現(xiàn)出黃色、淡黃色、橘紅色、微紅色等。細(xì)胞培養(yǎng)用血清的標(biāo)準(zhǔn)是血紅蛋白含量不高于20mg/dl,顏色越紅,數(shù)值越高;反之,數(shù)值越低。實(shí)際上,血紅蛋白含量的高低對(duì)血清并無(wú)直接影響。這個(gè)指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過(guò)程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度,良好的操作能降低血清的溶血。

    三、總蛋白含量
    胎牛血清的總蛋白含量一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高,說(shuō)明采血的牛齡偏大,不是胎牛;數(shù)值偏低,表明血清可能摻水了。

    四、pH值
    根據(jù)藥典,胎牛血清的pH值在7.0-8.0之間,并沒(méi)有什么具體依據(jù)把進(jìn)口血清和國(guó)產(chǎn)血清用7.5這個(gè)分界線界定。

    五、滲透壓
    胎牛血清滲透壓的檢測(cè)一般采用冰點(diǎn)法,滲透壓摩爾濃度(mOsmol/kg):280-360之間

    六、微生物
    包括細(xì)菌、霉菌、支原體、噬菌體等。隨著各個(gè)品牌血清生產(chǎn)條件的改善提高,細(xì)菌、霉菌等“大型"微生物幾乎能100%控制。支原體通過(guò)0.1um3次無(wú)菌過(guò)濾去除。如CellMax胎牛血清,3次0.1um無(wú)菌過(guò)濾以后,又通過(guò)培養(yǎng)法和DNA染色法進(jìn)行支原體檢測(cè),結(jié)果均呈現(xiàn)陰性才會(huì)放行銷(xiāo)售。關(guān)于噬菌體主要是生產(chǎn)環(huán)境過(guò)程中帶入,又無(wú)法過(guò)濾,很難*清除,但對(duì)血清質(zhì)量影響不大,不過(guò)對(duì)于工業(yè)生產(chǎn)的客戶來(lái)說(shuō),往往會(huì)采用γ照射的胎牛血清來(lái)避免噬菌體。

    七、免疫球蛋白
    免疫球蛋白的數(shù)值能*體現(xiàn)出采血時(shí)的牛齡情況,新生牛血清容易產(chǎn)生IgM,IgG的含量也偏高;胎牛血清不含IgM,IgG的含量也較低。可以通過(guò)血清蛋白電泳SDS檢測(cè)。
    低IgG的胎牛血清推薦適用于抗體生產(chǎn)及相關(guān)領(lǐng)域。

    有下列情況者,對(duì)血清內(nèi)毒素應(yīng)格外留意篩選:
    1.養(yǎng)干細(xì)胞時(shí),干細(xì)胞對(duì)內(nèi)毒素非常敏感,如果血清中內(nèi)毒素≥3EU/ml時(shí),干細(xì)胞很容易死亡。很多使用者,在血清在試用前,就通過(guò)提早審核該批次《檢測(cè)報(bào)告》,以決定是否入圍進(jìn)行試用。
    2.養(yǎng)免疫細(xì)胞時(shí),過(guò)高的內(nèi)毒素可誘導(dǎo)免疫細(xì)胞釋放炎癥因子,抑制小鼠紅細(xì)胞集落的形成等。
    3.基因敲除相關(guān)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn),培養(yǎng)的細(xì)胞要盡可能保持其原始狀態(tài),任何引導(dǎo)細(xì)胞衰老或凋亡的試劑,都會(huì)讓后續(xù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果“失之毫厘,謬以千里"。在準(zhǔn)備血清和其他試劑時(shí),選擇極低的內(nèi)毒素(最好≤1EU/ml),對(duì)實(shí)驗(yàn)至關(guān)重要;
    4.原代培養(yǎng)、雜交瘤融合、細(xì)胞轉(zhuǎn)染,或者肝細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、內(nèi)皮等難養(yǎng)細(xì)胞的擴(kuò)增,這些都需要挑選好的血清給細(xì)胞以有力支持。因此,挑選更低的內(nèi)毒素,是保證實(shí)驗(yàn)順利的第一步。
    5.實(shí)驗(yàn)室有些細(xì)胞,需要長(zhǎng)期培養(yǎng)、長(zhǎng)期凍存,或者經(jīng)常復(fù)蘇、經(jīng)常培養(yǎng)的,血清會(huì)經(jīng)常或長(zhǎng)時(shí)間作用于細(xì)胞。為保證細(xì)胞的健康,都應(yīng)該選用更低內(nèi)毒素的血清,以避免內(nèi)毒素長(zhǎng)久對(duì)細(xì)胞的毒性影響。
    總之,血清中內(nèi)毒素含量過(guò)高,更容易導(dǎo)致細(xì)胞“亞健康",造成數(shù)據(jù)不準(zhǔn),或細(xì)胞狀態(tài)不良、老化、甚至死亡,導(dǎo)致試驗(yàn)中斷失敗。血清中的內(nèi)毒素越低越好。
    全球細(xì)胞培養(yǎng)學(xué)會(huì)均依據(jù)內(nèi)毒素對(duì)血清的品質(zhì)進(jìn)行分級(jí)和命名。
    內(nèi)毒素含量越低的血清,級(jí)別就越高,以胎牛血清為例:
    當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量≤10EU/ml時(shí),此血清為特級(jí)胎牛血清;
    當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量﹥10EU/ml,≤ 25EU/ml時(shí),此血清為優(yōu)級(jí)胎牛血清;
    當(dāng)血清中內(nèi)毒素含量≥ 25EU/ml時(shí),此血清為標(biāo)準(zhǔn)級(jí)胎牛血清;

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